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    唯尚立德?lián)碛谐墒旄咝У腡ALEN及CRISPR/Cas9基因敲除技術(shù)平臺、完善的模式生物構建平臺,完美整合從載體設計、構建、活性鑒定、基因突變動(dòng)物模型建立等各個(gè)環(huán)節?,F推出小鼠、大鼠等模式生物基因敲除技術(shù)服務(wù),為客戶(hù)提供周期短、性?xún)r(jià)比高的模式生物構建服務(wù)。至今未曾失敗過(guò),我們鄭重承諾失敗將全額退款。

    TALEN靶向敲除基因原理簡(jiǎn)介

    TALE技術(shù)(Transcription activator-like effectors)是一種嶄新的分子生物學(xué)工具??茖W(xué)家發(fā)現,來(lái)自植物細菌Xanthomonassp的TAL蛋白的核酸結合域的氨基酸序列與其靶位點(diǎn)的核酸序列有恒定的對應關(guān)系。利用TAL的序列模塊,可組裝成特異結合任意DNA序列的模塊化蛋白。TALEN(Transcription activator-like effector(TAL) nucleases)技術(shù)是基于TALE與人工改造的核酸內切酶的切割域(FokI)構建針對任意特定核酸靶序列的重組核酸酶。通過(guò)TAL的DNA識別域結合到靶位點(diǎn)上,及FokI切割域形成二聚體后,可特異性對目標DNA序列實(shí)現切斷。在隨后的非同源末端連接修復過(guò)程中,斷開(kāi)的DNA雙鏈會(huì )由于堿基的隨機增減從而以一定的概率實(shí)現目標基因功能的缺失。

     


     

    CRISPR/Cas9靶向敲除基因原理簡(jiǎn)介

    CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是一種由RNA指導Cas核酸酶對特定基因序列進(jìn)行DNA修飾的技術(shù)。CRISPR/CRISPR-associated(Cas)是細菌和古細菌一種不斷進(jìn)化適應的免疫防御機制。在這系統中,CRISPR對特定DNA的識別是由crRNA或向導RNA通過(guò)堿基互補配對,定向尋找目標DNA序列。靶定目標序列后,Cas9蛋白負責對目標DNA進(jìn)行剪切,造成靶DNA雙鏈斷裂。在隨后的非同源末端連接修復過(guò)程中,斷開(kāi)的DNA雙鏈會(huì )由于堿基的隨機增減從而以一定的概率實(shí)現目標基因功能的缺失。

     

    TALEN/CRISPR構建基因敲除小(大)鼠技術(shù)流程圖
     

    服務(wù)流程及周期

    步驟 內容 周期
    打靶質(zhì)粒構建 設計不同靶點(diǎn),SNP檢測,組裝TALEN質(zhì)粒2-3對,或3條gRNA,檢測TALEN的SSA活性或gRNA活性 1個(gè)月
    得到Founder 選擇活性較高的打靶質(zhì)粒,體外轉錄成mRNA,顯微注射受精卵,胚胎移植到代孕母鼠子宮,3周后出生,2周齡基因型鑒定。數量:至少2只 2-3個(gè)月
    得到F1代雜合子 2個(gè)月后性成熟,Founder和野生型小鼠交配,3周后出生,2周齡基因型鑒定,獲得穩定傳代的基因突變雜合子F1代。數量:2個(gè)lines、至少2只/line(性別隨機,若甲方要求一雌一雄,如果第一批F1代小鼠都是同性別,則進(jìn)行第二次交配,每次交配到生出需3個(gè)月,依此類(lèi)推,直至一雌一雄。) 3-4個(gè)月

     

    我們的優(yōu)勢
    1、我們已經(jīng)具有4000多對TALEN質(zhì)粒、CRISPR/Cas9系統構建和活性驗證的成功經(jīng)驗,大量的技術(shù)經(jīng)驗使我們能準確、快速地構建出具有體內活性的TALEN和CRISPR/Cas9質(zhì)粒。
    2、我們具有強大的售前和售后技術(shù)支持團隊,可以為客戶(hù)提供免費專(zhuān)業(yè)的技術(shù)支持和方案設計及拓展。
    3、我們已經(jīng)成功使用TALEN及CRISPR/Cas9系統為客戶(hù)提供了上百例成功案例,囊括家蠶、斑馬魚(yú)、小鼠、大鼠等突變體,至今未曾失敗過(guò),我們的服務(wù)受到了客戶(hù)的一致認可。
    4、價(jià)格低、周期短。我們高效專(zhuān)業(yè)的技術(shù)平臺使得我們能在最短的時(shí)間內完成模式生物的構建服務(wù)。較短的時(shí)間使得我們能夠大大的節約成本,為客戶(hù)提供價(jià)格最低的服務(wù)

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