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  • 點(diǎn)突變小(大)鼠

     在目的基因上引入點(diǎn)突變,對于疾病模型的建立具有重大的意義,如候選點(diǎn)突變是基因疾病相關(guān)的人類(lèi)基因SNP,對目標基因的候選位點(diǎn)進(jìn)行點(diǎn)突變,若動(dòng)物模型上再現了該疾病的性狀,則建立的小鼠模型可以為精準治療提供模擬人類(lèi)疾病的動(dòng)物模型。

    技術(shù)原理簡(jiǎn)介

    基因點(diǎn)突變(Point Mutation)是指通過(guò)TALEN/CRISPR技術(shù)在靶基因的目的位置引進(jìn)特定的突變。通過(guò)針對靶基因的待突變位點(diǎn)設計相應的打靶質(zhì)粒,并且根據需要點(diǎn)突變的位置構建含點(diǎn)突變的Donor質(zhì)粒,將Donor質(zhì)粒與打靶質(zhì)粒共同顯微注射進(jìn)小鼠的受精卵中,TALEN/CRISPR定位到基因組上的靶序列并切割雙鏈DNA,在隨后的修復過(guò)程中,細胞以含同源序列的Donor質(zhì)粒為模版修復基因組DNA,最終獲得在目的DNA序列引進(jìn)點(diǎn)突變的小鼠。
     

     TALEN/CRISPR構建定點(diǎn)敲入小(大)鼠技術(shù)流程圖

     

    服務(wù)流程及周期

     


    服務(wù)流程及周期圖

    步驟 內容    周期
    敲入元件獲得  客戶(hù)提供或全基因合成 根據實(shí)際情況而定
    Cas9/gRNA的合成和同源模板(Donor)構建 合成Cas9/gRNA,檢測Cas9/gRNA活性,構建同源模板質(zhì)粒  2個(gè)月
    得到Founder Cas9/gRNA體外轉錄成mRNA和Donor質(zhì)粒共同顯微注射受精卵,胚胎移植到代孕母鼠子宮,3周后出生,2周齡基因型鑒定。 2-3個(gè)月
    得到F1代雜合子  2個(gè)月后性成熟,Founder和野生型小鼠交配,3周后出生,2周齡基因型鑒定,獲得穩定傳代的基因突變雜合子F1代。  3-4個(gè)月

     

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